土壤健康評(píng)估
酶是由微生物和其他生物體產(chǎn)生的生物催化劑，參與土壤中有機(jī)物質(zhì)的分解、養(yǎng)分循環(huán)和污染物降解等過(guò)程。土壤酶活性（如脫氫酶、蛋白酶、磷酸酶、脲酶等）的高低直接反映了土壤生物活性和土壤健康的狀況。通過(guò)酶活檢測(cè)，可以評(píng)估土壤的生物功能狀態(tài)，是評(píng)價(jià)土壤肥力和生態(tài)系統(tǒng)服務(wù)功能的重要指標(biāo)。
環(huán)境污染監(jiān)測(cè)
土壤微生物和酶活性對(duì)環(huán)境變化非常敏感，特別是對(duì)重金屬、有機(jī)污染物、農(nóng)藥等污染物的存在非常敏感。當(dāng)土壤受到污染時(shí)，微生物群落結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生改變，酶活性也會(huì)相應(yīng)下降，通過(guò)監(jiān)測(cè)這些變化，可以作為土壤污染早期預(yù)警的指標(biāo)，評(píng)估污染物對(duì)土壤生態(tài)系統(tǒng)的影響程度。
生態(tài)修復(fù)效果評(píng)估
在土壤污染治理和生態(tài)修復(fù)過(guò)程中，監(jiān)測(cè)土壤中微生物群落結(jié)構(gòu)和酶活性的變化，可以作為評(píng)估修復(fù)效果的一個(gè)重要參數(shù)。微生物活性的恢復(fù)和酶活性的提升通常意味著土壤生態(tài)功能正在逐步恢復(fù)，有助于指導(dǎo)修復(fù)策略的調(diào)整和優(yōu)化。
農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展
土壤微生物和酶在維持土壤肥力、促進(jìn)植物生長(zhǎng)方面起著核心作用。通過(guò)檢測(cè)這些指標(biāo)，可以指導(dǎo)合理施肥、輪作、有機(jī)農(nóng)業(yè)等實(shí)踐，促進(jìn)土壤養(yǎng)分循環(huán)，減少化學(xué)肥料和農(nóng)藥的依賴，從而支持農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。
檢測(cè)指標(biāo)
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指標(biāo)
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方法
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標(biāo)準(zhǔn)
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樣品
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用量/g
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過(guò)篩要求
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酶活
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土壤脲酶（S-UE）
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分光光度法
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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風(fēng)干樣
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0.5
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60目
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土壤堿性磷酸酶（S-AKP/ALP）
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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土壤酸性磷酸酶（S-ACP）
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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土壤中性磷酸酶（S-NP）
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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土壤蔗糖酶（S-SC）
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T/NAIA 010-2020 土壤蔗糖酶活性的測(cè)定 3,5-二硝基水楊酸比色法
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土壤過(guò)氧化氫酶（S-CAT）
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楊蘭芳,曾巧,李海波,閆靜靜.紫外分光光度法測(cè)定土壤過(guò)氧化氫酶活性
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土壤脫氫酶（S-DHA）
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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土壤過(guò)氧化物酶（S-POD）
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關(guān)松蔭《土壤酶及其研究法》
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土壤纖維素酶（S-CL）
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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土壤多酚氧化酶（S-PPO）
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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土壤硝酸還原酶（S-NR）
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關(guān)松蔭《土壤酶及其研究法》
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土壤酸性蛋白酶（S-ACPT）
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李振高《土壤與環(huán)境微生物研究法》
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土壤中性蛋白酶（S-NPT）
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李振高《土壤與環(huán)境微生物研究法》
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土壤堿性蛋白酶（S-AKPT）
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李振高《土壤與環(huán)境微生物研究法》
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土壤淀粉酶（S-AL）
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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土壤羥胺還原酶（S-AL）
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史云峰,武志杰,史奕,陳利軍,王殳屹.土壤羥胺還原酶活性測(cè)定方法的改進(jìn)
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土壤β-葡萄糖苷酶（S-β-GC）EC3.2.1.21
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）EC3.4.11.1
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段成偉,李希來(lái),馬盼盼,徐文印,柴瑜,蘇樂樂,楊鑫光.人工修復(fù)措施對(duì)退化高寒草甸土壤養(yǎng)分及酶活性的影響
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土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）
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關(guān)松蔭《土壤酶及其研究法》
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N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）EC3.2.1.30
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段成偉,李希來(lái),馬盼盼,徐文印,柴瑜,蘇樂樂,楊鑫光.人工修復(fù)措施對(duì)退化高寒草甸土壤養(yǎng)分及酶活性的影響
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β-木糖苷酶（S-BXYS）EC3.2.1.37
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呂志忠. 碳氮調(diào)節(jié)對(duì)草地土壤生物學(xué)特性的影響及其土壤肥力質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)
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土壤β-纖維素二糖苷酶（S-C1）/土壤纖維二糖水解酶（CBH）EC3.2.1.91
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呂志忠. 碳氮調(diào)節(jié)對(duì)草地土壤生物學(xué)特性的影響及其土壤肥力質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)
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漆酶（SL）
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蘇寶玲,王月陽(yáng),白震,孫釗,何紅波,張旭東.ABTS底物檢測(cè)漆酶活力條件和算法比較——以長(zhǎng)白山兩種林分土壤為例
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土壤FDA水解酶
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劉海芳,馬軍輝,金遼,陸琴,嚴(yán)蔚東,王校常.水稻土FDA水解酶活性的測(cè)定方法及應(yīng)用
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土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）
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關(guān)松蔭《土壤酶及其研究法》
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土壤天門冬酰胺酶（S-ASNase）ES3.5.1.1
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關(guān)松蔭《土壤酶及其研究法》
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土壤谷氨酰胺酶（S-GLS）EC3.5.1.2
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關(guān)松蔭《土壤酶及其研究法》
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其他酶活
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試劑盒或開發(fā)方法
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微生物
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細(xì)菌
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平板計(jì)數(shù)法
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林先貴《土壤微生物研究原理與方法》
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鮮樣，4℃運(yùn)輸保存
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20
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10目
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真菌
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微生物
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分光光度法檢測(cè)土壤酶活
分光光度法是檢測(cè)土壤酶活性的一種常見且有效的方法，它基于酶催化反應(yīng)產(chǎn)物或輔因子在特定波長(zhǎng)下的光吸收特性。這種方法快速、簡(jiǎn)便，適用于多種土壤酶的活性測(cè)定，如脲酶、磷酸酶、過(guò)氧化氫酶等。
技術(shù)原理
分光光度法基于比爾定律（Beer's Law），即在一定條件下，溶液的吸光度與溶液中溶質(zhì)的濃度成正比。通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。在土壤酶活性的測(cè)定中，分光光度法的基本原理是酶與底物混合經(jīng)培養(yǎng)后產(chǎn)生某種帶顏色的生成物，可在某一吸收波長(zhǎng)下產(chǎn)生特征性波峰，再用分光光度計(jì)測(cè)定設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)物及生成物的吸光值，由此確定酶活性的量。
實(shí)驗(yàn)步驟
土壤樣本制備：將土壤樣本研磨成細(xì)粉，然后用適當(dāng)?shù)木彌_液或提取劑提取土壤酶。提取過(guò)程可能需要通過(guò)搖晃、超聲波處理或離心等方式進(jìn)行。
反應(yīng)體系構(gòu)建：將土壤酶提取液與特定的底物、緩沖液及其他反應(yīng)必需的成分混合，構(gòu)成反應(yīng)體系。
溫育：將反應(yīng)體系置于適宜的溫度下溫育一段時(shí)間，讓酶催化反應(yīng)充分進(jìn)行。
終止反應(yīng)：在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)加入終止劑（如強(qiáng)酸或強(qiáng)堿）停止酶促反應(yīng)，防止反應(yīng)過(guò)度。
吸光度測(cè)定：使用分光光度計(jì)，在特定波長(zhǎng)下測(cè)量反應(yīng)前后溶液的吸光度變化。該波長(zhǎng)通常對(duì)應(yīng)于反應(yīng)產(chǎn)物或底物的最大吸收峰。
數(shù)據(jù)處理：根據(jù)吸光度的變化計(jì)算酶活性。酶活性通常表示為單位時(shí)間內(nèi)單位體積樣品中底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的量，單位如μmol/min/g干土。
注意事項(xiàng)
·標(biāo)準(zhǔn)曲線：為了準(zhǔn)確測(cè)定酶活性，通常需要建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，即已知濃度的產(chǎn)物或底物在特定波長(zhǎng)下的吸光度與濃度的關(guān)系圖。
·空白對(duì)照：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照，即不含酶的反應(yīng)體系，用于扣除背景吸光度。
·溫度和pH：酶活性受溫度和pH的影響較大，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)保持一致的條件。
·酶的專一性：某些酶可能對(duì)特定底物有專一性，選擇合適的底物和反應(yīng)條件對(duì)于獲得準(zhǔn)確的酶活性結(jié)果至關(guān)重要。
平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)土壤中微生物
平板計(jì)數(shù)法是檢測(cè)土壤中微生物數(shù)量的一種基本且廣泛使用的方法。它基于微生物在固體培養(yǎng)基上形成可觀察的菌落這一原理，通過(guò)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目來(lái)估算樣品中的微生物總數(shù)。
技術(shù)原理
平板計(jì)數(shù)法依賴于微生物在特定培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的能力。當(dāng)土壤樣本中的微生物被稀釋并接種到含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的固體培養(yǎng)基上時(shí)，單個(gè)微生物細(xì)胞可以生長(zhǎng)繁殖形成一個(gè)肉眼可見的菌落。通過(guò)統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)量，可以估算出原始土壤樣本中微生物的大致數(shù)量。
實(shí)驗(yàn)步驟
樣品準(zhǔn)備
從土壤中采取有代表性的樣品，避免表層污染和人為污染。
稱取適量土壤（通常為0.1g到1g，具體量根據(jù)土壤類型和預(yù)期微生物密度調(diào)整），放入含有無(wú)菌生理鹽水或其他適宜稀釋液的錐形瓶中。
系列稀釋
對(duì)土壤懸浮液進(jìn)行一系列梯度稀釋，通常稀釋到10^-1、10^-2、10^-3...等，以確保在平板上形成的菌落數(shù)落在可計(jì)數(shù)范圍內(nèi)（通常為30到300個(gè)菌落）。
平板接種
取一定量（如0.1mL或0.01mL）的每個(gè)稀釋度的土壤稀釋液，使用涂抹棒或傾注法均勻涂布到固體培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白胨瓊脂、馬丁氏瓊脂等，根據(jù)目標(biāo)微生物選擇合適的培養(yǎng)基）上。
培養(yǎng)
將接種后的平板倒置放入恒溫培養(yǎng)箱中，在適宜的溫度下培養(yǎng)（細(xì)菌通常為37°C，真菌為25°C到30°C），培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)微生物種類而定，一般細(xì)菌培養(yǎng)18-24小時(shí)，真菌可能需要更長(zhǎng)時(shí)間，如3-7天。
菌落計(jì)數(shù)
培養(yǎng)后，計(jì)數(shù)每個(gè)稀釋度平板上的菌落總數(shù)。選擇菌落數(shù)在30到300之間的稀釋度進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確保計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。
結(jié)果計(jì)算
根據(jù)稀釋倍數(shù)和計(jì)數(shù)結(jié)果，使用公式計(jì)算原始土壤樣品中的微生物數(shù)量（CFU/g或CFU/mL）。
注意事項(xiàng)
無(wú)菌操作：整個(gè)過(guò)程必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行，避免外界微生物的污染。
稀釋度選擇：合理選擇用于計(jì)數(shù)的稀釋度，過(guò)高或過(guò)低的菌落數(shù)都會(huì)影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。
重復(fù)性：每個(gè)稀釋度至少做三個(gè)平行平板，以提高結(jié)果的可靠性。
培養(yǎng)條件：確保培養(yǎng)溫度、時(shí)間和濕度條件適合目標(biāo)微生物的生長(zhǎng)，以利于菌落的形成。
樣品采集
點(diǎn)擊進(jìn)入【學(xué)院】查看土壤樣品的采集制備與保存運(yùn)輸。
樣本要求
在土壤檢測(cè)中，理化性質(zhì)的差異，使檢測(cè)需要的樣本類型和樣本量存在不同。
基本類型
風(fēng)干土：一般是利用自然條件風(fēng)干的土壤。風(fēng)干土多用于基本物理化學(xué)性質(zhì)的檢測(cè)，如土壤中氨、磷、鉀元素。取樣后放在室內(nèi)陰涼通風(fēng)處自行干燥，切忌陽(yáng)光直接暴曬，期間剔除雜質(zhì)，避免污染。
鮮土：一般是指采集的新鮮樣本、或低溫保存的樣本。鮮土一般用于微生物相關(guān)的測(cè)定，如土壤中微生物量碳、微生物量氨、微生物數(shù)量、酶活等。新鮮樣品一般不宜貯存，如需要暫時(shí)貯存，可將新鮮樣品裝入塑料袋，扎緊袋口，放在冰箱冷藏室4℃儲(chǔ)存或進(jìn)行速凍固定。
寄送要求
風(fēng)干土：一般常溫寄送即可。
鮮土：建議用干冰寄送，如條件不滿足，可放置多個(gè)冰袋。
漢廣提供“一站式”檢測(cè)服務(wù)，減少科研工作者的工作量。您只需要提供樣本原樣，漢廣會(huì)嚴(yán)格按照國(guó)標(biāo)或行標(biāo)，進(jìn)行樣本前處理，按照不同理化性質(zhì)的檢測(cè)要求，對(duì)土壤樣本進(jìn)行研磨，然后過(guò)濾不同規(guī)格的土壤。
取樣前，請(qǐng)與業(yè)務(wù)經(jīng)理溝通您的檢測(cè)需求，確認(rèn)樣品類型以及寄樣方式，以免影響檢測(cè)數(shù)據(jù)的真實(shí)性，造成時(shí)間及成本的損失！
服務(wù)流程
檢測(cè)儀器
